BSP甲基化检测_服务_上海卓灏医药科技有限公司
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BSP甲基化检测

原理:

结合重亚硫酸盐的测序法是一种灵敏的能直接检测分析基因组DNA甲基化模式的方法。重亚硫酸盐处理后,用针对改变后的DNA序列设计特异性引物并进行聚合酶链式反应(PCR)。 PCR产物中原先非甲基化的胞嘧啶位点被胸腺嘧啶所替代,而甲基化的胞嘧啶位点保持不变。PCR产物克隆后进行测序。通过这个方法能得到特定位点在各个基因组DNA分子中的甲基化状态。

特点:
1、特异性高,它能够提供特异性很高的分析结果,这是所有其他研究甲基化的分析方法所不能比拟的;
2、灵敏度高,可以用于分析少于100个细胞的检测样品。用微量的基因组DNA进行分析就能得到各个DNA分子精确的甲基化位点分布图。


BSP流程图

DNA用重亚硫酸盐处理后进行PCR扩增,扩增片段纯化后连接进载体,转化大肠杆菌,过夜培养后挑单个阳性克隆进行测序。得到每个DNA分子特定区域甲基化位点的分布图。


实验流程:
1、DNA制备
用DNA抽提试剂盒(Promega, cat. No. A1125)抽提组织,细胞培养物,石蜡包埋组织切片样品中的基因组DNA;
2、重亚硫酸盐处理;
3、DNA纯化
用试剂盒纯化重亚硫酸盐处理后的DNA样品;
4、DNA脱磺基反应;
5、PCR扩增;
6、PCR产物琼脂糖电泳后回收纯化,随后连接到pGEM-T EASY 载体中克隆及测序。

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